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技術(shù)支持

預(yù)裝柱用途及簡介
更新時(shí)間:2015-06-09   點(diǎn)擊次數(shù):2003次

      預(yù)裝柱主要用于純化蛋白質(zhì),高純度的蛋白洗脫呈現(xiàn)窄峰洗脫條件溫和,保護(hù)目標(biāo)蛋白的活性,耐NaOH的清洗,可方便的配合注射器,蠕動(dòng)泵或連接液相色譜系統(tǒng)使用MBPTrap HP 為純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白標(biāo)記(MBP)的重組蛋白帶來了便利。

預(yù)裝柱簡介 

    MBPTrap HP 柱子裝有Dextrin Sepharose HP 凝膠。它牢固且又穩(wěn)定的瓊脂糖填料基架能使目標(biāo)蛋白洗脫呈一狹窄的峰,從而減少了進(jìn)一步濃縮的需求。

  純化在物理?xiàng)l件下進(jìn)行,溫和的洗脫方式保護(hù)了目標(biāo)蛋白的活性,其溫和的條件甚至可以純化完整的蛋白復(fù)合物。

由于結(jié)合的高度專一性,只需一步洗脫即可達(dá)到高純度。

    StrepTrap HP填料方便地提供了通過親和層析的方法純化Strep ( II )標(biāo)記的重組蛋白。這類預(yù)裝柱內(nèi)裝有StrepTactinTM SepharoseTM HP凝膠。streptavidin經(jīng)過特殊耦合改造成StrepTactin ,確保了其優(yōu)的結(jié)合特性。它牢固且又穩(wěn)定的瓊脂糖填料基架可帶來高分辨率,尖銳集中的洗脫峰和高的重現(xiàn)性。純化物理?xiàng)l件下進(jìn)行,且溫和的洗脫條件確保了目標(biāo)蛋白的活性。由于結(jié)合的高度專一性,只需一步洗脫即可達(dá)到高純度。

MKF疏水填料與疏水預(yù)裝柱

    MKF疏水性相互作用色譜柱填料的表面具有弱疏水性特征。RPC方法是基于強(qiáng)疏水性作用,而疏水性相互作用色譜(HIC: hydrophobic interaction chromatography)方法則依賴于溶質(zhì)與填料表面之間弱的疏水性相互作用。在高離子強(qiáng)度的鹽水溶液淋洗條件下,蛋白質(zhì)分子中的疏水性部分與填料表面產(chǎn)生疏水性相互作用而被吸附,當(dāng)淋洗液的離子強(qiáng)度逐漸降低時(shí),蛋白樣品則按其疏水性特征被依次洗脫,疏水性越強(qiáng),洗脫的時(shí)間越長,用此原理來實(shí)現(xiàn)分離。其特點(diǎn)是,既可以避免使用含有大量有機(jī)溶劑的淋洗體系,又能有效地保持被分離物質(zhì)的生物活性。

一般來說,生物大分子大都含有或強(qiáng)或弱的疏水區(qū)域,在不同環(huán)境中,生物樣品與各種疏水介質(zhì)所產(chǎn)生的疏水性相互作用大小亦各不相同,正是由于這種原因,才使HIC分離方法得以建立和實(shí)施。MKF的HIC填料,絕大多數(shù)是多孔結(jié)構(gòu)的,它們的負(fù)載量都比較高,每毫升樹脂可負(fù)載數(shù)十毫克的蛋白樣品。以特定物理結(jié)構(gòu)PS-DVB樹脂為基質(zhì)的產(chǎn)品,更適于在很高流速下,快速的精細(xì)分離純化蛋白質(zhì)等生物樣品。
  MKF疏水作用介質(zhì)有四種類型,它們有不同的化學(xué)表面和不同的疏水性,其疏水性強(qiáng)弱程度,依次為苯基>C8>C4>異丙基>醚鏈

分辨率和選擇性

   蛋白質(zhì)在高鹽濃度時(shí)吸附在樹脂上的吸附強(qiáng)度與樹脂疏水性和鹽濃度直接相關(guān)。選擇合適的疏水作用介質(zhì),無機(jī)鹽的用量可以降低到低,活性回收可以大。高疏水性介質(zhì)常用來分離低疏水性的蛋白。弱疏水性介質(zhì)常用來純化疏水性很強(qiáng)的蛋白質(zhì)比如單克隆抗體膜蛋白,如果這兩種蛋白和疏水介質(zhì)結(jié)合的非常牢固會(huì)導(dǎo)致低的回收率。

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